نطاق تشونغتشينغ الثقافة البكتيرية

أنواع الوسائط الثقافية:

وسائط الثقافة هي منتجات اصطناعية لمختلف العناصر الغذائية اللازمة لنمو البكتيريا وتكاثرها. يمكن لوسائل الاستزراع المناسبة أن تجعل البكتيريا تنمو وتتكاثر بسرعة في المختبر، مما يسهل فصل البكتيريا وتحديدها. يمكن تقسيمها إلى وسائط الثقافة الأساسية، ووسائط ثقافة المغذيات، ووسائط الثقافة الانتقائية، ووسائط ثقافة التعريف، ووسائط الثقافة اللاهوائية، ووسائط الثقافة الخاصة.

01# الوسائط الثقافية الأساسية

يحتوي فقط على العناصر الغذائية الأساسية اللازمة لنمو البكتيريا، وهو الأكثر استخدامًا على نطاق واسع، وهو الأساس لإعداد مجموعة متنوعة من الوسائط الثقافية. تشمل الوسائط الشائعة وسائط ثقافة المرق ووسائط ثقافة الآجار.

02# وسائط الثقافة الغذائية

إن إضافة مواد عضوية مثل الجلوكوز أو الدم أو المصل أو الاستسقاء أو مستخلص الخميرة إلى وسائط الاستزراع الأساسية يمكن أن يلبي احتياجات نمو البكتيريا ذات المتطلبات الغذائية الأعلى أو لإثراء البكتيريا. على سبيل المثال، تتم إضافة البيض والبطاطس والجلسرين وما إلى ذلك إلى وسط زراعة المتفطرة السلية.

03# وسائط الثقافة الانتقائية

وسط استنباتي مصنوع من خلال الاستفادة من الحساسيات المختلفة لأنواع مختلفة من البكتيريا تجاه المواد الكيميائية، مما يسمح للبكتيريا المعزولة بالتكاثر بكميات كبيرة ويمنع نمو البكتيريا الأخرى. يمكن للمثبطات الموجودة في وسط الثقافة أن تمنع نمو البكتيريا غير المستهدفة أو تجعلها تنمو بشكل سيئ، مما يساعد على اكتشاف وتحديد البكتيريا المستهدفة. وسط الاستنبات المختار هو في الغالب صفائح صلبة، والتي تستخدم لفصل بكتيريا معينة من العينات.

04 # تحديد الثقافة المتوسطة

تتم إضافة مكونات محددة معينة، مثل السكريات والكحوليات والمؤشرات، إلى وسط الاستنبات للتحقق من التفاعلات الكيميائية الحيوية المختلفة للبكتيريا بغرض تحديد البكتيريا وتحديد هويتها.

05# وسط زراعة البكتيريا اللاهوائية

يجب أن تنمو البكتيريا اللاهوائية الإجبارية في ظل الظروف اللاهوائية، لذلك من الضروري إضافة عوامل اختزال مثل السيستين وثيوجليكولات الصوديوم إلى وسط الاستزراع لتقليل احتمالية الأكسدة والاختزال في وسط الاستزراع، ويجب عزلها عن الهواء الخارجي حتى لا يتم استزراعها. الوسط نفسه هو بيئة لاهوائية.

06# وسط استزراع خاص

يتم استخدامه لزراعة بعض البكتيريا التي تحتاج إلى النمو في ظل ظروف خاصة. مثل وسط ثقافة إثراء الملح مفرط التوتر، ووسط ثقافة إثراء السكر مفرط التوتر، ووسط ثقافة كاجان المعدل، وما إلى ذلك.

إعداد وسط الثقافة:

العملية الرئيسية لإعداد وسط الثقافة العامة متشابهة بشكل أساسي، بما في ذلك الخلط والذوبان وضبط الرقم الهيدروجيني والترشيح والتعبئة والتعقيم والاختبار والحفظ.

احتياطات المختبر:

يجب تشغيل المزرعة البكتيرية في أي وقت لمنع التلوث وانتشار مسببات الأمراض، أي العملية المعقمة. احتياطات المختبر البكتيري هي كما يلي:

01 #

يجب إجراء الثقافة البكتيرية في غطاء التلقيح أو غرفة معقمة. يمكن إجراء المختبرات ذات الشروط على مقعد نظيف.

02 #

عند استخدام حلقة التلقيح لفصل البكتيريا وزرعها، يلزم إجراء التعقيم قبل الاستخدام وبعده. يستخدم التعقيم باللهب بشكل عام.

03 #

عند أخذ العينات أو زرعها من زجاجات الثقافة أو مزارع أنبوب الاختبار، يجب تمريرها فوق اللهب 2 إلى 3 مرات قبل فتح فم الزجاجة أو فم الأنبوب أو إغلاقه. لا تسمح للمواد البكتيرية بتلويث أسطح العمل والأشياء الأخرى.

04 #

إذا انكسر أنبوب الاختبار عن طريق الخطأ وكان المحلول البكتيري ملوثًا، فلا داعي للذعر، وأبلغ الشخص المسؤول بالأمر على الفور، ثم عالج سطح العمل أو الأرض الملوثة بـ 3% من اللايسول أو 5% من حمض الكربوليك، وانقعها لمدة لا تقل عن 10 دقائق. 30 دقيقة.

05 #

بعد الانتهاء من العمل، قم بتعريضه للأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة، أو امسح سطح العمل بمادة اللايسول 3% واغسل يديك.

تلقيح الحلقات والإبر:

في علم الأحياء الدقيقة، التلقيح هو عملية إضافة البكتيريا إلى وسط استنباتي حتى تتمكن من التكاثر هناك. غالبًا ما يتم إدخال اللقاحات أو المصل أو المواد المستضدية الأخرى إلى الجسم من أجل زيادة المناعة ضد مرض معين.

حلقات التلقيح والإبر هي أدوات محمولة ومدمجة تستخدم لإدخال الكائنات الحية الدقيقة مثل البكتيريا أو الخميرة إلى صفيحة أو أنبوب وسط النمو قبل الحضانة أو الضرب أو النمو. عادة ما يتم نقل اللقاح ونشره في وسط استنبات سائل، أو تخطيطه أو ثقبه في وسط أجار صلب، أو كليهما.

تتكون حلقة التلقيح وإبرة التلقيح من ثلاثة أجزاء، وهي جزء الحلقة (الإبرة)، وجزء المقبض المعدني وجزء مقبض العزل. عادةً ما تستخدم حلقة التلقيح وإبرة التلقيح سلك التسخين الكهربائي (النيكل). يختلف قطر الحلقة حسب غرض الاستخدام، بشكل عام 2-4 مم، وطول الحلقة والإبرة 40-50 مم.

يجب تعقيم حلقة التلقيح (الإبرة) قبل الاستخدام وبعده. ضع نهاية حلقة التلقيح (الإبرة) بشكل مستقيم في اللهب، واحرق جزء سلك النيكل باللون الأحمر، ثم قم بتدوير المقبض المعدني لحلقة التلقيح (الإبرة) عبر اللهب 3 مرات للتعقيم. بعد التبريد، استخدمه لأخذ البكتيريا أو اختبار العينات.

مباشرة بعد استخدام حلقة التلقيح (الإبرة)، قم بتسخين جزء سلك النيكل الملوث في اللهب المختزل (اللهب الداخلي) لتجفيف البكتيريا أو العينات المرتبطة بنهاية الحلقة (الإبرة) لمنع البكتيريا أو العينات المتبقية في الحلقة (الإبرة) من التعرض المفاجئ للحرارة العالية والرذاذ، مما يؤدي إلى تلويث البيئة والتسبب في مخاطر العدوى. ثم انقله إلى اللهب المؤكسد (اللهب الخارجي) ليحرقه باللون الأحمر للتعقيم، وأخيراً قم بتمرير جزء المقبض المعدني ذهاباً وإياباً في اللهب 3 مرات. بعد الاستخدام، يجب وضع حلقة التطعيم (الإبرة) على الرف فورًا وعدم التخلص منها أبدًا لتجنب حرق الطاولة أو غيرها من الأشياء.

منطقة عمليات التطعيم

من أجل تجنب التلوث البيئي والبكتيريا المحمولة جوا تلويث الثقافة أثناء عملية التلقيح، ينبغي إجراء التلقيح في غطاء التلقيح أو غرفة معقمة. بالإضافة إلى ذلك، تشمل المعدات اللازمة للمختبرات البكتريولوجية أيضًا مناضد عمل معقمة وخزائن للسلامة الحيوية ومختبرات للسلامة الحيوية.

01# غطاء التطعيم

هناك العديد من أنماط أغطية التلقيح، والتي يمكن أن تكون مصنوعة من الإطارات الخشبية والزجاج، أو مصنوعة من زجاج شبكي. قبل الاستخدام، يجب مسح غطاء التطعيم برفق باستخدام حمض الكربوليك 3٪ أو اللايسول. يجب أن يكون مزودًا بمصباح تعقيم بالأشعة فوق البنفسجية، والذي يمكن تشعيعه قبل الاستخدام لضمان عدم وجود غبار وبكتيريا في الغطاء. بعد اكتمال العملية، يجب تنظيف الجزء الداخلي على الفور وتطهير الغطاء.

02# منضدة معقمة

المعروف أيضًا باسم المقعد النظيف للغاية، فهو يعتمد حاليًا على تدفق الهواء الصفائحي العمودي. يتم ضغط الهواء الذي تمت تصفيته بواسطة الفلتر المسبق في صندوق الضغط السلبي في صندوق الضغط الثابت بواسطة مروحة طرد مركزي متغيرة السرعة، ومن ثم يتم تصفيته بواسطة مرشح عالي الكفاءة للترشيح الثانوي. يمر تدفق الهواء النظيف المتدفق من سطح مخرج الهواء عبر منطقة العمل بسرعة رياح مقطعية معينة وموحدة، مما يزيل جزيئات الغبار والجزيئات الميكروبية، وبالتالي يشكل بيئة عمل خالية من الغبار ومعقمة. عند الاستخدام، يجب تشغيل جهاز التعقيم بالأشعة فوق البنفسجية قبل 50 دقيقة، وإيقاف تشغيله وتشغيل المنفاخ بعد 30 دقيقة. يُمنع منعا باتا تخزين الأشياء غير الضرورية في منطقة التنقية للحفاظ على نمط تدفق الهواء النظيف دون إزعاج.

03# غرفة معقمة

الغرفة المعقمة، والمعروفة أيضًا بالغرفة النظيفة، هي غرفة صغيرة يتم تركيبها داخل المختبر لإجراء العمليات المعقمة. يجب أن تكون هناك أجهزة تنقية الهواء، ومعقمات الأشعة فوق البنفسجية، وما إلى ذلك في الغرفة.

04# خزانة السلامة الحيوية

حاليًا، تُستخدم خزانات السلامة الحيوية في الغالب في التجارب الميكروبيولوجية. وهي عبارة عن خزانات عادم ذات مرشح ضغط سلبي مصممة لحماية المشغل وبيئة المختبر والمواد التجريبية عند تشغيل المواد التجريبية المعدية مثل المزارع الأولية والسلالات البكتيرية (الفيروسية) والعينات التشخيصية، وذلك لتجنب التعرض للهباء الجوي والمعدي. البقع التي قد تتولد أثناء العمليات المذكورة أعلاه.

05# مختبر السلامة الحيوية

مختبر السلامة الحيوية (مختبر السلامة الحيوية)، ويشار إليه بـ "مختبر BSL". ويشير إلى مختبر تم بناؤه من خلال التصميم التجريبي الموحد، وتكوين المعدات التجريبية، واستخدام معدات الحماية الشخصية. من الناحية الهيكلية، يتكون من حاجز حماية أولي (معدات السلامة) وحاجز حماية ثانوي (المرافق). تشكل مجموعات مختلفة من معدات ومرافق السلامة لحماية السلامة البيولوجية في المختبرات أربعة مستويات من حماية السلامة البيولوجية، حيث يكون المستوى الأول هو الأدنى.