Cultivo bacteriano Alcance de Chongqing

Tipos de medios de cultivo:

Los medios de cultivo son productos artificiales de diversos nutrientes necesarios para el crecimiento y la reproducción bacteriana. Los medios de cultivo adecuados pueden hacer que las bacterias crezcan y se reproduzcan rápidamente in vitro, lo que facilita su separación e identificación. Se puede dividir en medios de cultivo básicos, medios de cultivo de nutrientes, medios de cultivo selectivos, medios de cultivo de identificación, medios de cultivo anaeróbicos y medios de cultivo especiales.

01# Medios de cultivo básicos

Contiene sólo los nutrientes más básicos necesarios para el crecimiento bacteriano, es el más utilizado y es la base para preparar una variedad de medios de cultivo. Los más comunes incluyen medios de cultivo en caldo y medios de cultivo en agar.

02# Medios de cultivo de nutrientes

Agregar sustancias orgánicas como glucosa, sangre, suero, ascitis o extracto de levadura a los medios de cultivo básicos puede satisfacer las necesidades de crecimiento de bacterias con mayores requerimientos nutricionales o para el enriquecimiento bacteriano. Por ejemplo, se añaden huevos, patatas, glicerol, etc. al medio de cultivo de Mycobacterium tuberculosis.

03# Medios de cultivo selectivos

Medio de cultivo elaborado aprovechando las diferentes sensibilidades de diferentes tipos de bacterias a sustancias químicas, que permite que las bacterias aisladas se multipliquen en grandes cantidades e inhibe el crecimiento de otras bacterias. Los inhibidores contenidos en el medio de cultivo pueden inhibir el crecimiento de bacterias no objetivo o hacer que crezcan mal, lo que favorece la detección e identificación de las bacterias objetivo. El medio de cultivo seleccionado son principalmente placas sólidas, que se utilizan para separar determinadas bacterias específicas de las muestras.

04# Medio de cultivo de identificación

Ciertos componentes específicos, como azúcares, alcoholes e indicadores, se agregan al medio de cultivo para verificar diversas reacciones bioquímicas de las bacterias con el fin de identificarlas e identificarlas.

05# Medio de cultivo para bacterias anaerobias

Las bacterias anaeróbicas obligatorias deben crecer en condiciones anaeróbicas, por lo que es necesario agregar agentes reductores como cisteína y tioglicolato de sodio al medio de cultivo para reducir el potencial redox en el medio de cultivo, y debe aislarse del aire exterior para que el cultivo El medio en sí es un ambiente anaeróbico.

06# Medio de cultivo especial

Se utiliza para cultivar algunas bacterias que necesitan crecer en condiciones especiales. Como medio de cultivo hipertónico enriquecido con sal, medio de cultivo hipertónico enriquecido con azúcar, medio de cultivo de Kagan modificado, etc.

Preparación del medio de cultivo:

El proceso principal de preparación del medio de cultivo general es básicamente similar e incluye mezclar, disolver, ajustar el pH, filtrar, empaquetar, esterilizar, probar y conservar.

Precauciones de laboratorio:

El cultivo bacteriano debe operarse en cualquier momento para evitar la contaminación y la propagación de patógenos, es decir, operación aséptica. Las precauciones del laboratorio bacteriano son las siguientes:

01#

El cultivo bacteriano debe realizarse en una campana de inoculación o en una sala estéril. Los laboratorios con condiciones se pueden realizar en mesa limpia.

02#

Cuando se utiliza un asa de inoculación para separar y trasplantar bacterias, se requiere esterilización antes y después de su uso. Generalmente se utiliza la esterilización por llama.

03#

Al tomar muestras o trasplantarlas de frascos de cultivo o cultivos en tubos de ensayo, se deben pasar sobre la llama de 2 a 3 veces antes de abrir la boca del frasco, la boca del tubo o cerrarlo. No permita que materiales bacterianos contaminen encimeras y otros objetos.

04#

Si el tubo de ensayo se rompe accidentalmente y la solución bacteriana está contaminada, no entre en pánico, infórmelo inmediatamente a la persona a cargo y luego trate la encimera o el suelo contaminado con lisol al 3% o ácido fénico al 5% y déjelo en remojo durante al menos 30 minutos.

05#

Después de terminar el trabajo, irradie con luz ultravioleta durante 30 minutos o limpie la encimera con Lysol al 3% y lávese las manos.

Asas y agujas de inoculación:

En microbiología, la inoculación es el proceso de agregar bacterias a un medio de cultivo para que puedan multiplicarse allí. A menudo se introducen en el cuerpo vacunas, suero u otras sustancias antigénicas para aumentar la inmunidad a una determinada enfermedad.

Los asas y agujas de inoculación son instrumentos compactos y portátiles que se utilizan para introducir microorganismos como bacterias o levaduras en una placa o tubo de medio de crecimiento antes de la incubación, multiplicación o crecimiento. El inóculo generalmente se transporta y se extiende en un medio de cultivo líquido, se extiende o se perfora en un medio de agar sólido, o ambas cosas.

El asa de inoculación y la aguja de inoculación constan de tres partes, a saber, la parte del asa (aguja), la parte del mango metálico y la parte del mango aislante. El asa de inoculación y la aguja de inoculación suelen utilizar alambre calefactor eléctrico (níquel). El diámetro del bucle varía según el propósito de uso, generalmente de 2 a 4 mm, y la longitud del bucle y la aguja es de 40 a 50 mm.

El asa de inoculación (aguja) debe esterilizarse antes y después de su uso. Coloque el extremo del asa de inoculación (aguja) en posición vertical sobre la llama, queme la parte del alambre de níquel en rojo y luego gire el mango de metal del asa de inoculación (aguja) a través de la llama 3 veces para esterilizarlo. Después de enfriar, úselo para tomar bacterias o muestras de prueba.

Inmediatamente después de usar el asa de inoculación (aguja), caliente la parte del alambre de níquel contaminado en la llama reductora (llama interna) para secar las bacterias o muestras adheridas al extremo del asa (aguja) para evitar que queden bacterias o muestras residuales en el asa. (aguja) de ser expuesta repentinamente a altas temperaturas y salpicaduras, contaminando así el medio ambiente y provocando riesgos de infección. Luego muévalo a la llama oxidante (llama exterior) para quemarlo en rojo para esterilizarlo, y finalmente pase la parte del mango de metal hacia adelante y hacia atrás en la llama 3 veces. Después de su uso, el asa de inoculación (aguja) debe colocarse en la rejilla inmediatamente y nunca desecharse para evitar quemar la mesa u otros objetos.

Área de operación de inoculación

Para evitar la contaminación ambiental y las bacterias del aire que contaminan el cultivo durante el proceso de inoculación, la inoculación debe realizarse en una campana de inoculación o en una sala estéril. Además, el equipamiento necesario para los laboratorios bacteriológicos también incluye mesas de trabajo estériles, armarios de bioseguridad y laboratorios de bioseguridad.

01# Campana de inoculación

Hay muchos estilos de campanas de inoculación, que pueden estar hechas de marcos de madera y vidrio, o de plexiglás. Antes de su uso, la campana de inoculación debe limpiarse ligeramente con ácido carbólico al 3% o Lysol. Debe estar equipado con una lámpara de esterilización ultravioleta, que puede irradiarse antes de su uso para garantizar que no haya polvo ni bacterias en la campana. Una vez completada la operación, se debe limpiar el interior inmediatamente y desinfectar la campana.

02# Banco de trabajo estéril

También conocido como banco súper limpio, actualmente adopta flujo de aire laminar vertical. El aire filtrado por el prefiltro en la caja de presión negativa se presiona hacia la caja de presión estática mediante un ventilador centrífugo de velocidad variable y luego se filtra mediante un filtro de alta eficiencia para filtración secundaria. El flujo de aire limpio que sale de la superficie de salida de aire pasa a través del área de trabajo a una velocidad del viento transversal cierta y uniforme, eliminando partículas de polvo y partículas microbianas, formando así un ambiente de trabajo estéril y libre de polvo. Cuando esté en uso, el esterilizador UV debe encenderse con 50 minutos de anticipación, apagarse y encenderse el ventilador después de 30 minutos. Está estrictamente prohibido almacenar objetos innecesarios en el área de purificación para mantener intacto el patrón del flujo de aire limpio.

03# Sala aséptica

Una sala estéril, también conocida como sala limpia, es una pequeña sala instalada dentro del laboratorio para operaciones asépticas. La habitación debe tener dispositivos de filtración de aire, esterilizadores UV, etc.

04# Gabinete de bioseguridad

Actualmente, las cabinas de bioseguridad se utilizan principalmente en experimentos microbiológicos. Son gabinetes de escape con filtro de presión negativa diseñados para proteger al operador, el entorno del laboratorio y los materiales experimentales cuando se utilizan materiales experimentales infecciosos, como cultivos primarios, cepas bacterianas (virales) y muestras de diagnóstico, para evitar la exposición a aerosoles infecciosos y salpicaduras que puedan generarse durante las operaciones anteriores.

05# Laboratorio de Bioseguridad

Laboratorio de Bioseguridad (Biosafety Laboratory), denominado “laboratorio BSL”. Se refiere a un laboratorio construido mediante diseño experimental estandarizado, configuración de equipos experimentales y uso de equipos de protección personal. Estructuralmente consta de una barrera de protección primaria (equipos de seguridad) y una barrera de protección secundaria (instalaciones). Diferentes combinaciones de equipos e instalaciones de seguridad para la protección de la bioseguridad en el laboratorio constituyen cuatro niveles de protección de la bioseguridad, siendo el nivel uno el más bajo.