Portée de la culture bactérienne à Chongqing

Types de milieux de culture :

Les milieux de culture sont des produits artificiels contenant divers nutriments nécessaires à la croissance et à la reproduction bactérienne. Des milieux de culture appropriés peuvent permettre aux bactéries de se développer et de se reproduire rapidement in vitro, ce qui facilite la séparation et l'identification des bactéries. Il peut être divisé en milieux de culture de base, milieux de culture nutritifs, milieux de culture sélectifs, milieux de culture d'identification, milieux de culture anaérobies et milieux de culture spéciaux.

01# Milieux de culture de base

Contient uniquement les nutriments les plus basiques nécessaires à la croissance bactérienne, est le plus largement utilisé et constitue la base de la préparation d’une variété de milieux de culture. Les milieux de culture les plus courants comprennent les milieux de culture en bouillon et les milieux de culture en gélose.

02# Milieux de culture nutritifs

L'ajout de substances organiques telles que le glucose, le sang, le sérum, l'ascite ou l'extrait de levure aux milieux de culture de base peut répondre aux besoins de croissance de bactéries ayant des besoins nutritionnels plus élevés ou à un enrichissement bactérien. Par exemple, des œufs, des pommes de terre, du glycérol, etc. sont ajoutés aux milieux de culture de Mycobacterium tuberculosis.

03# Milieux de culture sélectifs

Un milieu de culture réalisé en tirant parti des différentes sensibilités de différents types de bactéries aux substances chimiques, qui permet aux bactéries isolées de se multiplier en grande quantité et inhibe la croissance d'autres bactéries. Les inhibiteurs contenus dans le milieu de culture peuvent inhiber la croissance de bactéries non ciblées ou les rendre médiocres, ce qui favorise la détection et l'identification des bactéries cibles. Le milieu de culture sélectionné est principalement constitué de plaques solides, utilisées pour séparer certaines bactéries spécifiques des échantillons.

04# Milieu de culture d'identification

Certains composants spécifiques, tels que des sucres, des alcools et des indicateurs, sont ajoutés au milieu de culture pour vérifier diverses réactions biochimiques des bactéries dans le but d'identifier et d'identifier les bactéries.

05# Milieu de culture pour bactéries anaérobies

Les bactéries anaérobies obligatoires doivent se développer dans des conditions anaérobies, il est donc nécessaire d'ajouter des agents réducteurs tels que la cystéine et le thioglycolate de sodium au milieu de culture pour réduire le potentiel redox dans le milieu de culture, et elles doivent être isolées de l'air extérieur afin que la culture Le milieu lui-même est un environnement anaérobie.

06# Milieu de culture spécial

Il est utilisé pour cultiver certaines bactéries qui doivent se développer dans des conditions particulières. Tels que le milieu de culture hypertonique enrichi en sel, le milieu de culture hypertonique enrichi en sucre, le milieu de culture de Kagan modifié, etc.

Préparation du milieu de culture :

Le processus principal de préparation du milieu de culture général est fondamentalement similaire, comprenant le mélange, la dissolution, l'ajustement du pH, le filtrage, l'emballage, la stérilisation, les tests et la conservation.

Précautions de laboratoire :

La culture bactérienne doit être opérée à tout moment pour éviter la contamination et la propagation d'agents pathogènes, c'est-à-dire une opération aseptique. Les précautions du laboratoire bactérien sont les suivantes :

01#

La culture bactérienne doit être réalisée sous hotte d’inoculation ou dans une salle stérile. Les laboratoires sous conditions peuvent être réalisés sur une paillasse propre.

02#

Lors de l’utilisation d’une anse d’inoculation pour séparer et transplanter des bactéries, une stérilisation est requise avant et après utilisation. La stérilisation à la flamme est généralement utilisée.

03#

Lors du prélèvement ou du repiquage d'échantillons à partir de flacons de culture ou de cultures en éprouvette, il faut les passer 2 à 3 fois sur la flamme avant d'ouvrir l'embouchure du flacon, l'embouchure du tube ou de le fermer. Ne laissez pas les matières bactériennes contaminer les comptoirs et autres objets.

04#

Si le tube à essai est accidentellement cassé et que la solution bactérienne est contaminée, ne paniquez pas, signalez-le immédiatement au responsable, puis traitez le plan de travail ou le sol contaminé avec 3 % de lysol ou 5 % d'acide phénique, et laissez-le tremper pendant au moins 30 minutes.

05#

Une fois le travail terminé, irradiez avec de la lumière UV pendant 30 minutes, ou essuyez le plan de travail avec 3 % de Lysol et lavez-vous les mains.

Inoculation des anses et des aiguilles :

En microbiologie, l'inoculation est le processus consistant à ajouter des bactéries à un milieu de culture afin qu'elles puissent s'y multiplier. Des vaccins, du sérum ou d'autres substances antigéniques sont souvent introduits dans l'organisme afin d'augmenter l'immunité contre une certaine maladie.

Les anses et les aiguilles d'inoculation sont des instruments portatifs et compacts utilisés pour introduire des micro-organismes tels que des bactéries ou des levures dans une plaque ou un tube de milieu de croissance avant l'incubation, la multiplication ou la croissance. L'inoculum est généralement transporté et répandu dans un milieu de culture liquide, étalé ou percé dans un milieu gélose solide, ou les deux.

L'anse d'inoculation et l'aiguille d'inoculation se composent de trois parties, à savoir la partie boucle (aiguille), la partie poignée métallique et la partie poignée isolante. L’anse d’inoculation et l’aiguille d’inoculation utilisent généralement du fil chauffant électrique (nickel). Le diamètre de la boucle varie en fonction du but d'utilisation, généralement de 2 à 4 mm, et la longueur de la boucle et de l'aiguille est de 40 à 50 mm.

L'anse d'inoculation (aiguille) doit être stérilisée avant et après utilisation. Mettez l'extrémité de la boucle d'inoculation (aiguille) à la verticale dans la flamme, brûlez la partie du fil de nickel en rouge, puis faites tourner la poignée métallique de la boucle d'inoculation (aiguille) à travers la flamme 3 fois pour la stérilisation. Après refroidissement, utilisez-le pour prélever des bactéries ou tester des échantillons.

Immédiatement après avoir utilisé l'anse d'inoculation (aiguille), chauffez la partie du fil de nickel contaminée dans la flamme réductrice (flamme intérieure) pour sécher les bactéries ou les échantillons attachés à l'extrémité de l'anse (aiguille) afin d'éviter que les bactéries ou les échantillons résiduels ne se trouvent sur l'anse. (aiguille) d’être soudainement exposée à une chaleur élevée et à des éclaboussures, polluant ainsi l’environnement et entraînant des risques d’infection. Déplacez-le ensuite vers la flamme oxydante (flamme extérieure) pour le brûler en rouge pour la stérilisation, et enfin passez la partie métallique du manche d'avant en arrière dans la flamme 3 fois. Après utilisation, l'anse d'inoculation (aiguille) doit être placée immédiatement sur le support et ne jamais être jetée pour éviter de brûler la table ou d'autres objets.

Zone d’opération d’inoculation

Afin d'éviter la pollution de l'environnement et les bactéries en suspension dans l'air qui contaminent la culture pendant le processus d'inoculation, l'inoculation doit être effectuée sous une hotte d'inoculation ou dans une salle stérile. En outre, l'équipement nécessaire aux laboratoires de bactériologie comprend également des établis stériles, des enceintes de biosécurité et des laboratoires de biosécurité.

01# Cagoule d'inoculation

Il existe de nombreux styles de hottes d'inoculation, qui peuvent être constituées de cadres en bois et en verre, ou en plexiglas. Avant utilisation, la hotte d'inoculation doit être légèrement essuyée avec de l'acide carbolique à 3 % ou du Lysol. Il doit être équipé d'une lampe de stérilisation ultraviolette, qui peut être irradiée avant utilisation pour garantir l'absence de poussière et de bactéries dans la hotte. Une fois l’opération terminée, l’intérieur doit être immédiatement nettoyé et la hotte doit être désinfectée.

02# Établi stérile

Également connu sous le nom de banc super propre, il adopte actuellement un flux d’air laminaire vertical. L'air filtré par le pré-filtre dans la boîte à pression négative est pressé dans la boîte à pression statique par un ventilateur centrifuge à vitesse variable, puis filtré par un filtre à haute efficacité pour une filtration secondaire. Le flux d'air propre soufflé par la surface de sortie d'air traverse la zone de travail à une vitesse de vent transversale certaine et uniforme, éliminant les particules de poussière et les particules microbiennes, formant ainsi un environnement de travail stérile et sans poussière. Lors de son utilisation, le stérilisateur UV doit être allumé 50 minutes à l'avance, puis éteint et le ventilateur démarré après 30 minutes. Il est strictement interdit de stocker des objets inutiles dans la zone de purification afin de maintenir le flux d'air propre sans perturbation.

03# Salle aseptique

Une salle stérile, également appelée salle blanche, est une petite pièce installée à l’intérieur du laboratoire pour les opérations aseptiques. Il devrait y avoir des dispositifs de filtration d'air, des stérilisateurs UV, etc. dans la pièce.

04# Armoire de biosécurité

Actuellement, les enceintes de biosécurité sont principalement utilisées dans les expériences microbiologiques. Il s'agit d'enceintes d'échappement à filtre à pression négative conçues pour protéger l'opérateur, l'environnement du laboratoire et le matériel expérimental lors de l'utilisation de matériels expérimentaux infectieux tels que des cultures primaires, des souches bactériennes (virales) et des échantillons de diagnostic, afin d'éviter l'exposition aux aérosols infectieux et éclaboussures pouvant être générées lors des opérations ci-dessus.

05# Laboratoire de biosécurité

Laboratoire de Biosécurité (Laboratoire de Biosécurité), dénommé « Laboratoire BSL ». Il fait référence à un laboratoire construit selon une conception expérimentale standardisée, une configuration d'équipement expérimental et l'utilisation d'équipements de protection individuelle. Structurellement, il se compose d'une barrière de protection primaire (équipements de sécurité) et d'une barrière de protection secondaire (installations). Différentes combinaisons d'équipements et d'installations de sécurité pour la protection de la biosécurité en laboratoire constituent quatre niveaux de protection de la biosécurité, le niveau un étant le plus bas.